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新品上市 | RevIT? AAV Enhancer, 提高AAV產(chǎn)量的又一利器!

腺相關(guān)病毒 (AAV) 是基因治療中使用最廣泛的傳遞機(jī)制。近年來,基于AAV病毒開發(fā)的基因療法的研發(fā)及臨床試驗注冊項目數(shù)量呈指數(shù)級增長,至目前,美國FDA已批準(zhǔn)五項AAV療法,同時,用于基因治療的AAV是全球市場上最昂貴的藥物之一,其中售價最高的Hemgenix®,每劑價格約為350萬美元。由于該療法每劑量可能需要1011-1016載量的AAV病毒,如何實現(xiàn)高效的AAV生產(chǎn),已成為工藝流程優(yōu)化中的重要一環(huán)。

西美杰代理的Mirus成立于1996年,在核酸遞送領(lǐng)域深耕多年,TransIT-VirusGEN® GMP 轉(zhuǎn)染試劑支持AAV及慢病毒(LV)從科研到GMP商業(yè)級別生產(chǎn)。不同于傳統(tǒng)基于單組分的轉(zhuǎn)染試劑(如陽離子聚合物聚乙烯亞胺,PEI),Mirus將專利多聚物及脂質(zhì)技術(shù)進(jìn)行多重組合,針對不同細(xì)胞類型,不同應(yīng)用場景,有著不同轉(zhuǎn)染方案。

Mirus專利遞轉(zhuǎn)平臺Polymers + Lipids的多重、多功能組合


     在病毒生產(chǎn)工藝方面,除了需要
克服細(xì)胞遞轉(zhuǎn)過程中的多重阻礙,以實現(xiàn)更高效轉(zhuǎn)染和更低細(xì)胞毒性;增強(qiáng)子的加入,大幅度提升多種血清型AAV病毒生產(chǎn)載量。但Mirus并沒有止步于此,為了進(jìn)一步提高下游生產(chǎn)中的AAV產(chǎn)量, 今年七月底西美杰代理的Mirus發(fā)布用于AAV生產(chǎn)的RevIT? AAV Enhancer,可搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 轉(zhuǎn)染試劑或其他品牌轉(zhuǎn)染試劑 (PEI)。基于HEK293懸浮細(xì)胞數(shù)據(jù),相對于老版本AAV增強(qiáng),RevIT? AAV EnhancerAAV基因組滴度提高1.2-4.9,并且使用更便捷,非常容易整合現(xiàn)有AAV生產(chǎn)工藝流程中。Mirus RevIT? AAV Enhancer的推出,使得AAV上游生產(chǎn)成本進(jìn)一步降低成為可能,進(jìn)而降低基因治療藥物單劑量成本。

 

RevIT? AAV Enhancer

 

 

RevIT? AAV Enhancer:可以將AAV基因組滴度提升1.2-4.9倍


實驗結(jié)果顯示,平行對比Mirus TransIT-VirusGEN®搭配老版本AAV增強(qiáng)子(VirusGen + Enh 1.0)新版本RevIT? AAV Enhancer (VirusGen + RevIT),針對AAV2、AAV8、AAV9不同血清型,基因組滴度分別有著1.6、4.9以及1.2倍提升除此之外,在測試的所有血清型中,使用RevIT? AAV Enhancer也在不同程度上收獲了更高比例的實心率 (圖1)。該結(jié)果表明,在搭配Mirus TransIT-VirusGEN®轉(zhuǎn)染試劑時,新版本增強(qiáng)劑RevIT? AAV Enhancer可顯著提高AAV基因組滴度(GC/mL)實心率(%Full Capsids)。

RevIT Transfection VirusGEN

圖1 . 相比Mirus老版本增強(qiáng)子,加入RevIT? AAV Enhancer后,可將AAV基因組拷貝數(shù)提升1.2-4.9,同時改善AAV病毒實心率。

 

RevIT? AAV Enhancer具有廣泛適配性,搭配其他品牌轉(zhuǎn)染試劑PEI,AAV病毒基因組滴度有著顯著提升

平行測試兩個品牌轉(zhuǎn)染試劑:Polyplus FectoVIR®轉(zhuǎn)染試劑(“Polymer F)以及Polyplus PEIpro®轉(zhuǎn)染試劑(“Polymer P),在加入Mirus RevIT? AAV Enhancer,針對不同血清型AAV2、AAV8、AAV9,AAV基因組滴度分別有著1.7-2.0x、1.7-2.2x、2.2-2.3x提升(圖2)。實驗結(jié)果表明,在搭配其他品牌病毒轉(zhuǎn)染試劑時,Mirus RevIT? AAV Enhancer可顯著提高AAV病毒基因組滴度(GC/mL)。

RevIT AAV transfection enhancer improves titer across serotypes

圖2. “Polymer F”以及“Polymer P”病毒轉(zhuǎn)染試劑搭配Mirus RevIT? AAV Enhancer,針對不同血清型AAV,其病毒基因組滴度都有著顯著提升。

RevIT? AAV Enhancer具有廣泛的適配性,可適用于不同培養(yǎng)基體系

Mirus TransIT-VirusGEN®轉(zhuǎn)染試劑搭配RevIT? AAV Enhancer,在不同品牌的病毒生產(chǎn)培養(yǎng)基中,具有很好的兼容性。測試使用293-VP 2.0細(xì)胞,搭配培養(yǎng)基類型包括VPM (Thermo Fisher) BalanCD HEK 293 (Irvine Scientific)。實驗結(jié)果表明,針對不同血清型AAV2、AAV5、AAV8、AAV9,RevIT? AAV Enhancer在不同培養(yǎng)基實驗條件下AAV病毒基因組滴度提升方面并無顯著差異(圖3。

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圖3. 更換不同品牌病毒生產(chǎn)培養(yǎng)基,AAV病毒基因組滴度的增加無顯著差異。


Rev
IT? AAV Enhancer實驗流程更靈活,在轉(zhuǎn)染的不同時間窗口加入有著近似表現(xiàn)

為了進(jìn)一步確認(rèn)加入RevIT? AAV Enhancer提高AAV產(chǎn)量是否需要嚴(yán)格把控加入時間,平行測試不同加入時間點(diǎn),包括轉(zhuǎn)染前30min或60min、轉(zhuǎn)染時及轉(zhuǎn)染后。實驗結(jié)果顯示,于對照,在不同時間點(diǎn)加入RevIT? AAV Enhancer AAV8病毒基因組滴度穩(wěn)步的提升(2倍),并且病毒實心率也穩(wěn)定保持在相同水平(圖4)。該實驗結(jié)果表明,RevIT? AAV Enhancer加入時間點(diǎn)的靈活性,一定程度上簡化了生產(chǎn)工作流。






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圖4.  RevIT? AAV Enhancer在轉(zhuǎn)染的不同時間窗口加入有著近似表現(xiàn)

 

實驗tips如何進(jìn)行病毒轉(zhuǎn)染試劑評估?什么是病毒載量?如何檢測?

  更多詳細(xì)信息,請查看Technical Resources中Virus Titer Reference Card ,更加詳細(xì)地介紹了檢測和計算病毒滴度的詳細(xì)方法。

A diagram of a scientific experiment Description automatically generated with medium confidence

相關(guān)產(chǎn)品信息及鏈接

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

鏈接

RevIT? AAV Enhancer

1.5 ml

MIR 8000

link

10 x 1.5 ml

MIR 8006

VirusGEN® AAV轉(zhuǎn)染試劑及RevIT? AAV Enhancer

For 1L of Culture

MIR 8007

For 10L of Culture

MIR 8008

TransIT-VirusGEN®轉(zhuǎn)染試劑

0.3 ml

MIR 6703

link

0.75 ml

MIR 6704

1.5 ml

MIR 6700

5 x 1.5 ml

MIR 6705

10 x 1.5 ml

MIR 6706

30 ml

MIR 6720

TransIT-VirusGEN® GMP級別轉(zhuǎn)染試劑

150 ml

MIR 6845-GMP

link

VirusGEN® AAV轉(zhuǎn)染試劑(套裝)

1 kit for 1 L of cell culture

MIR 6750

link

VirusGEN® GMP級別AAV轉(zhuǎn)染試劑(套裝)

1 Kit - for 50 L of cell culture

MIR 6815-GMP

link

VirusGEN® LV轉(zhuǎn)染試劑(套裝)

1 kit for 1 L of cell culture

MIR 6760

link

VirusGEN® GMP級別LV轉(zhuǎn)染試劑(套裝)

1 Kit - for 50 L of cell culture

MIR 6825-GMP

link

 
 如何查找或選擇適合轉(zhuǎn)染試劑?

請登錄Mirus官網(wǎng)線上工具Reagent Agent®,支持超過1000種細(xì)胞類型、多種核酸類型轉(zhuǎn)染試劑查詢。

 A picture containing drawing, shirt Description automatically generatedA screenshot of a computer Description automatically generated

 

Mirus產(chǎn)品年鑒

   西美杰代理的美國Mirus公司成立于1995年,是世界上很早開發(fā)高效、低毒轉(zhuǎn)染試劑的公司,同時也是該類試劑的主要供應(yīng)商之一。其產(chǎn)品線涵蓋化學(xué)轉(zhuǎn)染試劑、電轉(zhuǎn)染產(chǎn)品、病毒生產(chǎn)和轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)品,適用于基因功能研究、蛋白生產(chǎn)、病毒載體生產(chǎn)和動物模型構(gòu)建等領(lǐng)域。Mirus被公認(rèn)為轉(zhuǎn)染試劑開發(fā)的領(lǐng)跑者,其許多杰出成果獲得世界公認(rèn)與廣大用戶的好評。

 

   北京西美杰科技有限公司是Mirus中國區(qū)代理,始終秉承著專業(yè)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度為客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù),Mirus熱銷轉(zhuǎn)染產(chǎn)品常備現(xiàn)貨。如果您對上述產(chǎn)品感興趣,歡迎致電北京西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網(wǎng)站www.qdrudo.cn了解更多產(chǎn)品信息。

 

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